Les inconvénients de l'électrophorèse sur gel

A Electrophorresis analyse limitée de l'échantillon

• L'électrophorèse est spécifique à ce que le tissu que vous avez échantillonnés. Par exemple, si vous exécutez un transfert de Southern (un type d'électrophorèse) sur un frottis buccal, vous êtes à la recherche sur les gènes des cellules épithéliales de la joue et nulle part ailleurs dans votre corps. Parfois, cela peut être bénéfique, mais les chercheurs sont souvent intéressés par les effets les plus répandues.

  Des techniques telles que l'hybridation in situ (ISH) peuvent prendre dans une section de tissu et analyser l'expression du gène au niveau de chaque petite zone de l'échantillon. Ainsi, les chercheurs peuvent regarder chaque zone du cerveau dans un échantillon avec ISH, alors que les techniques électrophorèse ne peuvent regarder quelques domaines à la fois.

  

Mesures d'électrophorèse ne sont pas précis

• 
  
  
  
  

  L'électrophorèse sur gel peut effectivement séparer les protéines similaires avec des poids différents (ce qui est une technique appelée Western blot). Il peut les séparer plus précisément grâce à une technique connue sous le nom 2d electrophoresis- ce qui est commun à la protéomique.

  Malheureusement, toutes les mesures effectuées à partir de cette technique sont semi-quantitative, au mieux. Afin d'obtenir la masse précise (en poids) de protéines, de spectroscopie de masse doit être utilisé après que la protéine a été purifiée par électrophorèse. En outre, en comparant les quantités relatives des différentes molécules dépend de la densité de la bande (obscurité) de différents endroits sur le gel. Cette méthode a un certain degré d'erreur, et les échantillons sont habituellement exécuté plusieurs fois pour obtenir des résultats propres.

Substantielle échantillon de départ est requise

• L'électrophorèse est une technique d'isolement et d'identification visuellement différentes biomolécules. Ceci est réalisé en faisant passer un courant électrique à travers le gel pour séparer des molécules chargées de différents poids. Si la molécule qui vous intéresse est pas assez commune, sa bande sera pratiquement invisible et difficile à mesurer.

  ADN et l'ARN peuvent être amplifiés peu avant l'exécution de l'électrophorèse, mais il est pas pratique de le faire avec des protéines. Par conséquent, un grand échantillon de tissu est nécessaire pour exécuter ces tests. Cela peut limiter l'utilité de la technique, en particulier dans les analyses médicales. Il est pratiquement impossible de faire fonctionner l'électrophorèse sur des échantillons d'une seule cytométrie de flux de cellules et de l'immunohistochimie sont plus communément utilisés pour évaluer l'expression cellule par cellule des protéines. Une technique appelée PCR est excellent à mesurer précisément de petites quantités d'ARN.

  

Seules certaines molécules peuvent être visualisées

• L'électrophorèse est excellent à la séparation et à moyen identifier et grandes biomolécules. Cependant, la plupart des molécules que les chercheurs souhaitent étudier sont de petites hormones, les neurotransmetteurs à plus petite, et les ions ne peut être mesurée par électrophorèse. Ceci pour deux raisons: ils ne réagissent pas correctement avec la préparation d'électrophorèse (habituellement une technique appelée SDS PAGE) et, même si elles le faisaient, ils sont trop petits pour séparer correctement et se précipiteraient sur le fond du gel. Ces molécules sont mesurés par des techniques plutôt comme des immunoessais RIAAs (radio) et ELISA (dosage par immunosorbant lié à une enzyme).

L'électrophorèse est faible débit

• L'électrophorèse sur gel est généralement faible débit, ce qui signifie qu'il ne produit pas de données particulièrement rapidement. Contraste électrophorèse, où vous pouvez regarder une petite poignée de molécules d'ARN à la fois, avec la PCR (réaction en chaîne de la polymérase), qui peut simultanément évaluer des milliers d'échantillons. De même, la cytométrie en flux peut prendre des mesures à partir des milliers de cellules individuelles et établir des corrélations complexes, tout en électrophorèse regarde cellules en masse et ne peut pas faire de telles discriminations fines. PCR et le débit représentent cytométrie massivement processus parallèle et série, respectivement, et les deux dépassent de loin les capacités de l'électrophorèse pour générer des données de recherche.