Lyse est un mot qui vient du grec et signifie «diviser» ou simplement «d'éclater». Il est une description juste de ce qui arrive aux cellules dans un tampon de lyse, une solution qui brise les ouvrir pour en extraire leur contenu. Les scientifiques utilisent des tampons de lyse lors de l'extraction de l'ADN ou des protéines à partir de cellules pour l'analyse, en particulier dans le cas des bactéries. Le type de tampon de lyse cellulaire varie en fonction du type d'expérience, même si les éléments suivants sont des choix communs.
Buffer et Salt
Tampons de stabiliser le pH tandis que les cellules sont lysées. Tris-HCL est une mémoire tampon commune pour tamponner à un pH de 8 si le pH est souhaité, HEPES est un autre produit chimique de tampon commun dans ces expériences. Chlorure de sodium de sel peut également être inclus pour augmenter la force ionique, la concentration totale des solutés à l'extérieur des cellules. Ce dernier est important car l'eau peut diffuser à travers les membranes cellulaires des régions de concentration de soluté faible pour les régions de concentration de soluté élevé.
Détergent
Le détergent est le principal ingrédient qui dissout la membrane cellulaire de sorte que les contenus peuvent s'échapper. Les détergents sont des molécules amphipathiques, à savoir, des molécules avec une extrémité qui interagit facilement avec les molécules d'eau tandis que l'autre hydrophobe ou "craignant-eau" fin ne fait pas. Ils peuvent dissoudre les graisses, formant des micelles en petits amas où les queues hydrophobes des molécules de détergent pointent vers l'intérieur en direction des molécules de graisse. Détergents ordinaires comprennent le sodium dodécyl sulfate ou SDS, NP-40 et Triton X.
Agents chélateurs Inhibiteurs
Des tampons de lyse comprennent également typiquement des agents chélatants comme l'acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA) ou l'acide éthylèneglycol tétraacétique (EGTA). Ces produits chimiques se lient à des ions métalliques avec une charge 2 (par exemple, magnésium et calcium), ce qui les rend indisponible pour d'autres réactions. Beaucoup DNAses (protéines qui mâchent l'ADN) et de protéases (protéines qui découpent autres protéines) doivent ions magnésium à la fonction, donc en les privant de cet ingrédient clé, l'EDTA et EGTA aider à réduire le niveau de la protéase ou de l'activité de DNAse. Ils ne excluent pas complètement, cependant, et quelques protéases ne dépendent pas de cofacteurs de magnésium, de sorte tampons de lyse parfois comprennent également des produits chimiques appelés inhibiteurs de protéase, qui se lient aux protéases et les empêchent de fonctionner correctement.
La lyse alcaline
Lyse alcaline est une technique très courante pour la purification de plasmides à partir de bactéries. Cette méthode comporte trois solutions. La première contient du glucose, un tampon Tris-HCl, l'EDTA et RNAses. Le glucose crée une concentration de soluté élevée en dehors des bactéries afin qu'ils deviennent un peu molle, ce qui les rend plus faciles à lyse- l'EDTA et la fonction tris-HCL Comme déjà décrit, tandis que la RNAse sera mâcher tout ARN dans la cellule pour l'obtenir hors du chemin. La deuxième solution fait lyse des cellules. Celui-ci contient le détergent SDS et du NaOH, ce qui élève le pH à 12 ou plus, la dénaturation des protéines à l'intérieur de la cellule et de provoquer ADN se séparer en brins simples. La troisième solution contient de l'acétate de potassium pour restaurer le pH à un niveau plus neutre de sorte que les brins d'ADN de plasmide peuvent revenir ensemble. Dans l'intervalle, les protéines dénaturées et agglomèrent précipitent, tandis que les ions sulfate sont-dodécyle ainsi que les ions de potassium pour former un composé insoluble, qui précipite également à partir de la solution.