Dans les plantes en C4, deux types de cellules sont impliqués dans la photosynthèse. Le premier groupe, les cellules bundle-gaine, forment des gaines entourant les nervures des feuilles, tandis que l'autre groupe, les cellules du mésophylle, se disposent autour de la couche paquet-gaine. CO2 est capturé dans les cellules du mésophylle, où une enzyme appelée PEP carboxylase ajoute le CO2 à un composé appelé phosphoénolpyruvate (PEP) pour fabriquer un produit à quatre carbone. Ce produit quatre carbone est exportée vers les cellules bundle-gaine, où il se décompose en CO2 de l'enzyme Rubisco saisit alors de ce CO2 et se nourrit dans le cycle de Calvin. Contrairement rubisco, PEP carboxylase a peu ou pas d'affinité pour l'oxygène, de sorte que ce processus en deux étapes permet de minimiser l'étendue de la photorespiration en augmentant les concentrations de CO2 dans les cellules bundle-gaine, où le cycle de Calvin a lieu.